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酵母重組表達(dá)門冬胰島素的制備方法烦味。本發(fā)明公開了一種畢赤酵母重組表達(dá)門冬胰島素的制備方法。具體包括在酵母中高效分泌表達(dá)重組人門冬胰島素原、賴氨酰內(nèi)肽酶單一酶切獲得缺失B30的門冬胰島素狰丝、偶聯(lián)蘇氨酸酯确奄、脫保護(hù)、反相純化及結(jié)晶的工藝過程用动。本發(fā)明方法更適合重組門冬胰島素工業(yè)化制備矗绅。